一、 實驗儀器與試劑
表格一:實驗儀器
儀器  | 廠家  | 型號  | 
細胞培養(yǎng)箱  | Thermo Scientific  | HERA cell CO2  | 
酶標儀  | Thermo Scientific  | Multiskan Spectrum  | 
表格二:試劑
試劑  | 廠家  | 
DMEM/F12 培養(yǎng)基  | Gibco  | 
MTT  | Sigma  | 
胰酶  | 索來寶  | 
DMSO  | Sigma  | 
二、 實驗步驟
收集生長狀態(tài)良好的神經(jīng)干細胞,消化并調(diào)整細胞懸液濃度,分于 96 孔板,
每孔 100μL,5000 個細胞/孔。
細胞置于 37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜后,小心棄去培養(yǎng)基。
根據(jù)藥物在細胞溶液中的終濃度使用細胞培養(yǎng)液配制相應(yīng)的藥物儲備液,隨后加入至相應(yīng)培養(yǎng)液中形成不同濃度的工作液(藥物在工作液中的體積比為 5%)。每孔細胞分別加入 100μL 相應(yīng)的工作液,每種濃度均設(shè) 3 個復孔。同時設(shè)置正常培養(yǎng)孔(只加入*培養(yǎng)液培養(yǎng)的細胞)和空白孔(沒有細胞,只加入相同量的*培養(yǎng)液)。
37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 后小心吸去上清,加入 80μL 新鮮培養(yǎng)液
和 20μL MTT 溶液(5 mg/mL),并繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
吸掉上清,每孔加入 150μL DMSO,置搖床上低速振蕩 10 min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶標儀 490 nm 處測量各孔的 OD 值。
計算細胞生長抑制率%
實驗組OD值-空白組OD值
=1- ´100% 對照組OD值-空白組OD值

三、 實驗結(jié)果
藥物濃度  | 1mM  | 2mM  | 3mM  | 4mM  | 5mM  | 
OD 值  | 0.648678  | 0.651091  | 0.714305  | 0.777446  | 0.797002  | 
0.672702  | 0.712622  | 0.760024  | 0.783670  | 0.780728  | |
0.678589  | 0.733039  | 0.778568  | 0.806155  | 0.772555  | |
0.653876  | 0.699670  | 0.739670  | 0.778650  | 0.776490  | |
0.628845  | 0.687968  | 0.777404  | 0.758746  | 0.799384  | |
均值  | 0.656538  | 0.696878  | 0.753994  | 0.780933  | 0.785232  | 
細胞生長抑制率 % Mean±SD  | 23.87±1.99  | 18.76±3.06  | 11.51±2.72  | 8.10±1.70  | 7.55±1.22  | 
 
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